无菌产品是指产品上无存活微生物的产品。医疗器械灭菌的国家标准要求，当需要提供无菌产品时，要用各种措施使医疗器械各种来源的外来污染减至最少。多年来人们对医疗器械产品生产、保存和使用过程中出现的微生物污染问题进行了许多研究和评估。为控制产品中的微生物，要求无菌医疗器具生产企业建立和实施有效的质量管理体系，生产厂房按生产工艺和产品质量要求分为一般生产区和洁净区，对生产的过程进行管理，尽量减少医疗器械产品的微生物污染。然而，在自然界，微生物无处不在， 即使是在标准化生产条件下按照医疗器械质量体系进行生产，产品上也可能带有微生物。因此，采用适当的方法，对医疗器械产品上的微生物进行检验。
（一）微生物限度检测引用标准
目前，对医疗器械产品进行微生物检测常用的标准为：《中华人民共和国药典》2010年版二部附录Ⅺ J“ 微生物限度检查法”；GB/T 19973.1-2005《医疗器械的灭菌 微生物学方法 第1部分：产品上微生物总数的估计》；
（二）医疗器械的微生物检测方法
微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法，检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。
1.供试液制备要求 《中国药典》（2010年版二部）附录Ⅺ J“ 微生物限度检查法”规定，微生物限度检查应该在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。计数检验方法包括平皿法和薄膜过滤法。细菌及控制菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃。一般供试品的检验量为10g或10ml，膜剂为100cm2,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂不得少于4片。应根据供试品的理化特性与生物学性,采取适宜的方法备供试液。试液制备若需加温时,应均匀加热,且温度不应过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基,不得超过1h。
GB/T 19973.1-2005《医疗器械的灭菌 微生物学方法 第1部分：产品上微生物总数的估计》指出:微生物在表面附着的程度受表面特性、微生物自身和存在的其他材料（如润滑剂）的影响。污染源也会影响到附着程度。为获取微生物，所进行的处理包括漂洗（同时施加物理力）或直接表面取样。表面活性剂可以用于提高回收，但应认识到，较高浓度的表面活性剂可能会抑制微生物。其中供试液制备的方法有：袋蠕动、超声洗脱、搅动（带或不带玻璃珠）、涡旋式混合、冲洗、搅切（碎解）、擦拭、琼脂覆盖、接触板等。
此外，GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》及GB15980-1995《一次性使用医疗用品卫生标准》也给出了一定的要求。
GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》规定，在100级净化条件下用无菌方法打开用于检测的至少3个包装，从每个包装中取样，准确称取10g±1g样品。剪碎后加入到200ml灭菌生理氯化钠溶液（生理盐水）中，充分混匀，得到一个生理氯化钠溶液样液，液体产品用原液直接做样液。
GB15980-1995《一次性使用医疗用品卫生标准》针对初始污染菌检测所规定的采样方法是：对可破坏性方法取样的医疗用品，如输液（血）器，注射器、注射针、透析器及各类导管等，按《中国药典》（2010年版）规定执行；对不能用破坏性方法取样的特殊医疗用品可用浸有生理氯化钠溶液的棉拭子涂抺采样，被采表面<100cm2取全部表面；被采表面≥100cm2取100cm2；敷料类可用无菌手续取10g，放入100ml灭菌生理氯化钠溶液中，充分振荡后取样。采样数量:各类产品每批随机抽取10件样品。
2.细菌、霉菌及酵母菌计数 《中国药典》（2010年版二部）附录Ⅺ J“ 微生物限度检查法”规定：计数检验方法包括平皿法和薄膜过滤法。按照计数方法的验证试验的程序进行供试液制备。释稀释成1：10、1：102、1：103等稀释级的供试液。
平皿法规定根据菌数报告规则取相应稀释级的供试液1ml，置直径90m的无面平皿中,注入15～20ml温度不超过45℃的融化的营养琼脂或玫瑰红纳琼脂或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀,凝固，倒置培养，每稀释级每种培养基至少制备2个平板，一般营养琼脂用于细菌计数；玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌及酵母菌计数；酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基用于酵母菌计数。除另有规定外，细菌培养3d，霉菌、酵母菌培养5d，逐日观察菌落生长情况，点计菌落数，必要时,可适当延长培时间到7d进行菌落计数并报告。细菌、醇母菌宜选取平均落数小于300cfu，霉菌宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级，作为菌数报告(取两位有效数字)的依据。以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1g、1ml、10cm2供试品中所含的菌数。如各稀释级的平板均无菌落生长。或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以<1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。
薄膜过滤法是《中国药典》(2000年版)附录开始收载的无菌及微生物限度检查的检验方法之一。近年来，在检验中应用日趋广泛，具有简便、快速、准确的特点。可滤过较大量的检品和可滤除抑菌性物质，滤过后的薄膜，可直接接种于培养基中，或直接用显微镜观察，本法具有灵敏度高、不易产生假阴性结果、减少检测次数、节省培养基及操作简便等优点。薄膜过滤法的滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm，供试液经薄膜过滤后,若需要冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml，总冲洗量不得超过1000ml,以避免滤膜上的微生物受损伤。冲洗后取出滤膜、菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红纳琼脂或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基平板上培养，每种培养基至少制备1张滤膜。培养条件和计数方法同平皿法，每片滤膜上的菌落数应不超过100cfu。以1g、1ml、10cm2供试品中的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以<1报告菌数，或以<1乘以稀释倍数的值报告菌数。
GB/T 19973.1-2005《医疗器械的灭菌 微生物学方法 第1部分：产品上微生物总数的估计》提出修正系数的概念，它是指用于对活菌计数或灭菌前活菌计数进行修正的数值，以补偿产品上无法完全洗脱的微生物，以便计算出生物负载估计值。对生物负载估计进行确认应包括下列步骤：1、对从产品上取下微生物所用技术的适当性评价，如果取下微生物是该技术的一部分；2、对计算所取下微生物数量所用技术（包括微生物计数技术和培养条件）的适当性的评价；3、确立所用方法的回收效率，以便计算出修正系数。
3.控制菌的检测 《中国药典》2010年版二部附录Ⅺ J“ 微生物限度检查法”规定：
表1 药典中控制菌检查方法
| 项 目 | 《中华人民共和国药典》2010年版 |
大肠埃希菌 | 胆盐乳糖培养基增菌18～24h后，转种到MUG培养基观察是否呈现荧光，沿管壁加数滴靛基质试液，观察结果。如不能判断，划线于曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯培养基培养18～24h，观察结果。 |
大肠菌群 | 乳糖胆盐发酵管，若产酸产气，划线于曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯培养基培养18～24h，观察结果。若疑似，再接种于乳糖发酵管。 |
沙门菌 | 营养肉汤培养18～24小时，转种至四硫磺酸钠亮绿培养基培养18～24h，分别划线于胆盐乳琼脂（或沙门、志贺菌属琼脂）培养基和麦康凯琼脂（或曙红亚甲蓝琼脂）培养基平板上，培养18～24h，若疑似，用三糖铁琼脂培养基斜面进行鉴定试验。 |
铜绿假单胞菌 | 胆盐乳糖培养基增菌18～24h后，划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板培养18～24h。若疑似，接种于营养琼脂培养基斜面，培养18～24h，进行革兰染色、镜检及氧化酶试验，绿脓菌素试验。 |
金黄色葡萄球菌 | 亚碲酸钠（钾）肉汤（或营养肉汤）培养基培养18～24h，划线于卵黄氯化钠琼脂培养基或甘露醇氯化钠琼脂培养基平板，培养24～72h，若疑似，接种于营养琼脂培养基斜面上，培养18～24h，进行革兰染色，并接种于营养肉汤培养基中，培养18～24h，做血浆凝固酶试验。 |
梭菌 | 梭菌增菌培养基，厌氧条件培养48h ，分别涂抹接种于含庆大霉素的哥伦比亚琼脂培养基平板，厌氧条件培养48～72h，若有菌生长，进行革兰染色和过氧化氢酶试验。 |
白色念珠菌 | 沙氏葡萄糖液体培养基，培养48～72h，划线接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，培养24～48h，若疑似，接种至念珠菌显色培养基平板，培养24～48h。若有绿色或翠绿色菌生长，再接种于1%聚山梨酯80-玉米琼脂培养基上，培养24～48h，染色、镜检及芽管试验。 |
（三）仪器设备及器具
试验所需要的仪器设备及器具：超净工作台或生物安全柜、恒温培养箱（30～35℃）、生化培养箱（23～28℃）、高压蒸汽灭菌器、烧杯、试管及塞、培养皿、量筒、吸管等。