生物指示剂验证灭菌效果的缺点，不能在灭菌完毕，立即判断结果，需经一定时间培养后方能得出结果。
此外，也有化学指示剂，常用的化学物质有雷锁辛（119℃）、苯甲酸（121～123℃）、琥珀酸酐118～120℃）等晶体，于长3~4 cm、内径2~3mm玻管内，封口，将其直立于灭菌物品不同部位或插入敷料包内，灭菌毕，观察管内化学物质外形与灭菌前有无变化。化学指示剂只能指示灭菌舱内温度达到化学物质的熔点温度，但不能指示温度维持时间，不能作为灭菌合格的可靠依据。目前国内已研制出一种能指示温度和作用时间参数的受热变色或变形的化学指示剂，制成指示卡、指示管和指示胶带等形式，卡和管可用于监测物品中心灭菌情况，指示胶带亦可用于灭菌物品中心，也可贴于包裹表面。