常用体外诊断试剂的基本原理
按照检验方法，临床诊断试剂大致可分为临床生化检测试剂、免疫学和血清学检测试剂血液学及细胞遗传学检测试剂、微生物学检测试剂、体液排泄物及脱落细胞的检测试剂、分子生物学诊断试剂等种类。我们就其中主要的临床生化、免疫学、细胞学和基因诊断试剂的基本原理进行阐述。
ELISA-空斑实验（ELISA-Plaque assay） 又称酶联免疫斑点实验（en-zyme linked immunospot， ELISPOT）。细胞受到刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被特异单克隆抗体捕获。细胞分解后，被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后，PVDF孔板出现“紫色”的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过ELISPOT酶联斑点分析系统对斑点的分析后得出结果。该法与ELISA不同之处是，加入的待检标本是细胞，而非可溶性物质；所使用的底物可形成不溶性终产物。ELISPOT不仅可以用于B细胞分泌抗体功能的测定，也能检测分泌细胞因子的T细胞和巨噬细胞。ELISPOT法源自ELISA，又突破传统ELISA法，是定量ELISA技术的延伸和新的发展。它们最大的不同在于：
1、ELISA通过显色反应，在酶标仪上测定吸光度，与标准曲线比较得出的定量的可溶性蛋白总量。
2、ELISPOT通过显色反应，在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，可直接在显微镜下人工计数斑点或通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数，1个斑点代表1个活性细胞，从而计算出分泌该蛋白质或者细胞因子的细胞的频率。
3、由于是单细胞水平检测，ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏，能从20万～30万细胞中检出1个分泌该蛋白质的细胞。
4、捕获抗体为高亲和力、高特异性、低细菌内毒素单抗，在研究者以刺激剂激活细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子。