平板法是一种有条件的计数法，其限制条件大致如下：
1、细菌计数是以平板上生长的菌落数为基础
即每一个菌落代表一个菌细胞，亦即所谓"一对一"的关系，但实际上自然界存在的细菌常为团块聚集体，有的细菌其特征就是多细胞相联，如双球菌、四联球菌、八叠球菌等。测定时与匀质方式、条件关系极为密切；分散充分时，菌落生长数多、反之菌落数就少。故制备供试液时，力求均匀分散。但完全分散为单个细胞也是不可能的。故细菌数测定值实际上是菌落形成单位数（Colony fomming units，CFU）；一个菌落就是一个菌落形成单位，它可以由一个也可以由多个菌细胞形成。
2. 受特定培养基和培养条件限制
改变其中任一培养条件，就会改变被测菌类与数量。现行方法适用于多数需氧或兼性厌氧细菌生长，即采用营养琼脂培养基、温度为30~35℃、培养时间为48h，需气培养。
美、英、日等国是用大豆酪蛋白消化物培养基，营养条件不一，就可能导致测定结果不一致。
3. 有繁殖能力的菌细胞才能被认定"活菌"
因此，仅有繁殖能力的菌细胞才能形成菌落。死菌及某些受损伤的细菌或营养要求苛刻的细菌不能在规定的培养基上形成菌落，因而不被计数。欲计数某些有特殊生长要求的细菌数，须采用相应的方法。
以上三点既是平板法的特殊性，也是检验操作中必须重视的问题。