对于湖州无菌检验员培训学员来说，掌握倾注平板法是基本要求。待分离微生物样品经过一系列梯度（一般10倍递增）稀释后，使微生物菌体充分分散，成为单细胞，然后再取出一定量稀释液和固体培养基混匀，倾注到固体培养基的方法，再经过适宜的培养条件，形成单菌落的过程。

一、湖州无菌检验员培训内容之倾注平板法步骤

1.制备培养基：准备固体培养基和培养皿，高压蒸汽灭菌锅灭菌后固体培养基放置于水浴锅中备用。

2.标记：将事先制备好的无菌平板上标记10-7、10-8、10-9，每一个梯度稀释设置三个重复。

3.倾注：将固体培养基冷却至适合温度后，用无菌移液器吸取10-7稀释液0.1mL放入固体培养基中混匀，然后倒入编号10-7的3个培养皿中，或者用无菌移液器吸取10-7稀释液0.1mL放入编号10-7的3个平板中，倒固体培养基，在培养皿中混匀。

4.继续倾注：同样倾注10-8稀释液和10-9稀释液。

5.培养：将倾注好的平板平放于超净台上静置，待凝固后，将平板放置于恒温培养箱中倒置培养。

6.计数：待长出单菌落后即可计数。

7.菌落计数：同平板稀释法。

二、倾注平板法操作技巧

1.固体培养基温度不宜过高，过高会烫死微生物；温度也不能太低，容易凝固结块，无法和稀释液混匀。

如何确定合适的温度？

用手心手背触摸培养基，手心不烫手背烫的温度，基本就是50℃左右（不同人温度敏感性有一定差异）。

根据不同目标菌种，确定合适的温度，但一定要考虑固体培养基凝固的温度，一般40℃左右凝固。

2.培养基和稀释液混匀过程中，沿壁摇匀，以免产生起泡，影响观察和美观。

沿壁摇匀，能够保证培养基和稀释液充分混合，也不会产生气泡，切勿猛烈摇晃，气泡太多，制成的平板无法计数。

3.梯度稀释过程，一般用试管，试管长度要适宜，不宜过长，不方便操作，也不宜过短，无法摇匀或容易溢出。

4.为了操作方便，可以采用离心管代替试管进行梯度稀释，上下颠倒，容易混匀。

5.实验过程中用到的无菌水是无菌生理盐水，保护细胞。

三、倾注平板法注意事项

1.整个过程，需要在无菌环境下进行。

2.固体培养基放置在水浴锅中，也要经常摇动，不能静置。

3.如果发现平板上水太多，处理后再使用。

4.切记写清楚标记。

5.试验完毕，注意灼烧涂布器，以免影响环境，造成交叉污染。

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