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微生物实验技术之细菌的接种、分离、培养(八)
发布时间:2021-12-15浏览:750

分离技术-倾注分离法

倾注分离法 用于药品、食品等样品的活菌计数,也用于分离纯一的菌株。

将样品的混悬液或培养的菌液,经一系列稀释,选几个不同浓度的稀释液,用无菌吸管吸取1ml,注入无菌平皿内。再将熔化后再冷却至40~45℃的营养琼脂约15ml,倾注平皿内,立即转动平皿,使接种液与培养基充分混合均匀,待静置凝固,倒置培养。

通常是对连续的几个稀释度,例如10-2、10-3、10-4,各作2~3个倾注分离,利于活菌的计数测定,也为选取待检菌菌落提高机率。培养后,在平板上长出的菌落数,应随稀释倍数递减而由多至少。此法作为分离待检菌的缺点是操作偏繁,费时,而且菌落除在表面生长外,培养基内部也长,同为一种细菌在这两处的菌落形态特征有不同,如何识别长在培养基内部而在表面没有的某个菌落即是待检菌菌落,就很困难。

不论是划线分离、涂布分离、倾注分离,凡接种过的平板培养基,一律要翻转作倒置培养,倒置的作用是减少水分的蒸发和防止污染。

平板培养基上菌落的生长现象,因待检菌的不同和所用的平板也多不相同,但均可呈现一定的菌落特征。对经常要作检验的一些致病菌菌落特征,充分地掌握,才有把握从一个样品内分离出的多种多样的菌落之中,识别和挑取待检菌菌落。否则,即使分离出待检菌菌落,因不善识别,必然发生错误的选择和挑取,导致漏检。


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