常用体外诊断试剂的基本原理

按照检验方法，临床诊断试剂大致可分为临床生化检测试剂、免疫学和血清学检测试剂血液学及细胞遗传学检测试剂、微生物学检测试剂、体液排泄物及脱落细胞的检测试剂、分子生物学诊断试剂等种类。我们就其中主要的临床生化、免疫学、细胞学和基因诊断试剂的基本原理进行阐述。

PCR分析系统

1、普通的PCR仪  把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪叫传统的PCR仪，也叫普通PCR仪。如果要做不同的退火温度需要多次运行。主要是做简单的，对目的基因退火温度的扩增。该仪器主要应用于科研、教学、医学临床、检验检疫等机构。

2、梯度PCR仪  把一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(温度梯度)，通常有12种温度梯度，这样的仪器就叫梯度PCR仪。因为被扩增的不同DNA片段，其最适退火温度不同，通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增，从而一次性PCR扩增，就可以筛选出表达量高的最适退火温度，进行有效的扩增。主要用于研究未知DNA退火温度的扩增，这样节约成本的同时也节约了时间。主要用于科研、教学机构。梯度PCR仪在不设置梯度的情况下也可以做普通 PCR扩增。

3、原位PCR  用于从细胞内靶 DNA的定位分析的细胞内基因扩增仪，如病原基因在细胞的位置或目的基因在细胞内的作用位置等。是保持细胞或组织的完整性，使PCR反应体系渗透到组织和细胞中，在细胞的靶DNA所在的位置上进行基因扩增，不但可以检测到靶DNA,而且能标出靶序列在细胞内的位置，对分子和细胞水平上研究疾病的发病机制和临床过程及病理的转变有重大的实用价值。

4、实时荧光定量PCR仪  在普通 PCR仪的基础上增加一个荧光信号采集系统和计算机分析处理系统，就成了荧光定量PCR仪。其PCR扩增原理和普通PCR仪扩增原理相同，只是PCR扩增时加入的引物是利用放射性核素、荧光素等进行标记，使用引和荧光探针同时与模板特异性结合扩增。扩增的结果通过荧光信号采集系统实时采集信号连接输送到计算机分析处理系统，得出量化的实时结果输出，这种PCR仪叫做实时荧光定量PCR仪。实时荧光定量PCR仪有单通道、双通道和多通道。当只用一种荧光探针标记的时候，选用单通道，有多荧光标记的时候用多通道。单通道也可以检测多荧光标记的目的基因表达产物，因为一次只能检测一种目的基因的扩增量，需多次扩增才能检测完不同目的基因片段的量。该仪器主要用于医学临床检测、生物医药研发、食品行业、科研院校等机构。