常用体外诊断试剂的基本原理

按照检验方法，临床诊断试剂大致可分为临床生化检测试剂、免疫学和血清学检测试剂血液学及细胞遗传学检测试剂、微生物学检测试剂、体液排泄物及脱落细胞的检测试剂、分子生物学诊断试剂等种类。我们就其中主要的临床生化、免疫学、细胞学和基因诊断试剂的基本原理进行阐述。

分子诊断试剂　临床已经使用的分子诊断试剂主要有分子杂交技术、核酸扩增技术（PCR）产品和当前国内正在大力研究开发的基因芯片产品等。PCR产品灵敏度高、特异性强、诊断窗口期短，可进行定性、定量检测，广泛用于传染性疾病、优生优育、遗传病基因、肿瘤等的检测，基因芯片是分子生物学、微电子、计算机等多学科结合的结晶，综合了多种现代高精尖技术，目前产品种类也越来越多。

  聚合酶链反应  聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）又称体外核酸扩增技术，即对特定DNA片段进行非细胞依赖性扩增，其基本过程是将已提取的待测DNA在一对寡核甘酸引物、三磷酸核苷及耐热DNA聚合酶存在的情况下，体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、敏感度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于疾病的诊断或任何有DNA、RNA的地方。聚合酶链反应又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。PCR通常应用于癌基因、凋亡相关基因的表达、HLA的定型与基因分析与免疫球蛋白和T细胞受体多样性研究以及细胞因子、黏附分子的检测。PCR的方法有30余种，如多重PCR、巢式PCR、 二次PCR、共享引物PCR、逆转录PCR.锚定PCR等等。现在重点介绍一下临床检测非常普及的实时荧光聚合酶链式检测试剂，其反应原理是:标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性、低温复性、适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman 探针被切断，荧光素游离反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得CT值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。因此是一种用于定量检测DNA或RNA的检测方法。