常用体外诊断试剂的基本原理

按照检验方法，临床诊断试剂大致可分为临床生化检测试剂、免疫学和血清学检测试剂血液学及细胞遗传学检测试剂、微生物学检测试剂、体液排泄物及脱落细胞的检测试剂、分子生物学诊断试剂等种类。我们就其中主要的临床生化、免疫学、细胞学和基因诊断试剂的基本原理进行阐述。

免疫诊断试剂

  免疫胶体金标记技术( immunologic colloidal gold signature technique, ICS )

胶体金是由氯金酸(HAuCl4) 在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其他生物大分子结合，如SPA、 PHA、ConA 等。根据胶体金的些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，使得胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。胶体金是分散相粒子的金溶液，经凝聚法制成的金溶胶颗粒表面带有较多电荷，能吸附抗体形成金标记的抗体。用这种金标记抗体与组织或细胞标本中的抗原反应，借助显微镜观察颜色分布即可定位、定性测定组织或细胞中的抗原。该法最早用于免疫胶体金标记电镜技术，利用胶体金颗粒高电子密度，经衬染后对超微切片中的抗原做定量或定位研究。继后又应用于光镜并根据金催化还原很离子的原理，结合摄影技术以银增强金标抗体的可见性，建立了免疫金银法(IGSS)。此外，将荧光素吸附于胶体金，在荧光显微镜下作定向分布及定位观察荧光染色标本，可增强荧光效果。胶体金标记技术发展很快，如胶体金斑点渗滤试验和胶体金斑点免疫层析试验，尤其是后者检测敏感度高，操作简单，时间短，几分钟即可出现结果，试验用的均为干试剂，多个试剂被组合在一狭长度试剂条上，条上端（A）和下端（B）分别为吸水性材料，胶体金标记的特异性抗体干片粘贴在B的近端处，紧接着为硝酸纤维膜，其上有两个反应区域，测试区（T）包被有与待检抗原相应的特异性抗体，对照区（C）包被有对应的IgG抗体（二抗）。测试时将试纸下端浸入液体标本中，通过吸水材料虹吸作用吸引标本液向上移动，经过D处时如标本中有与金表抗体相应的抗原，两者即结合，胶体金颗粒发生聚集而显色。反之则不发生变化。过剩胶体金标记的抗体继续向前，与对照区的二抗结合，出现显色度质控条带。