培养基适用性检查是无菌检验员培训知识要点之一，是无菌检验得到可靠结果的基础。对于无菌检验知识体系来说，培养基适用性检查非常重要，且需要花一定时间去验证。

培养基的适用性检查方法：

1．无菌性检查

每批培养基一般随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。

2．灵敏度检查

菌种：培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存和确认，以保证试验菌株的生物学特性。

所用菌株包括：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B）26 003]、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC（B）10 104]、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC（B）63 501]、生孢梭菌（Clostridium sporogenes）[CMCC（B）64 941]、白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC（F）98 001]、黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC（F）98 003]。

3．菌液制备

接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，（30～35）℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，（20～25）℃培养2～3天，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度菌悬液。

接种黑曲霉至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，（20～25）℃培养5～7天或直到获得丰富的孢子，加入适量含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的孢子悬液。

菌悬液若在室温下放置，一般应在2小时内使用，若保存在（2～8）℃可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在（2～8）℃，在验证过的贮存期内使用。

4．培养基接种

取适宜装量的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照；取适宜装量的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种不大于100cfu 的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照。接种细菌的培养管培养时间不超过3天，接种真菌的培养管培养时间不得超过5天。

5．结果判定

空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。

如有无菌检验员培训报名需求或无菌检验员培训内训需求，欢迎您随时方便与检验员培训网联络，联系人：叶工，电话：18868735317，微信同。